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食品安全問題

方法注解

菌落總數測試片檢測方法
方法編號:5011

1 適用范圍: 可用于各類食品及原料中菌落總數的測定。也可用于與食品接觸的容器、操作臺和其他設備表面的衛生檢測。

2 方法原理: 將營養培養基、凝膠和氯化三苯基四氮唑(TTC)顯色劑等加載在試紙片,經加樣、培養后,細菌菌落在測試片上顯現出紅色菌斑,通過計數報告結果。

3 操作方法
3.1 樣品處理: 無菌稱取樣品25g(或25mL)放入含有225mL無菌生理鹽水的采樣瓶或均質杯內,經充分振搖(均質)做成1:10的稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內,用1mL滅菌吸管反復吸吹制成1:100的稀釋液。以此類推,做出1:1000等稀釋度的稀釋液,每個稀釋度更換一支滅菌吸管。
3.2接種: 一般食品選2~3個稀釋度進行檢測,含菌量少的液體樣品(如食用純水和礦泉水等)可直接用原液檢測。將測試片放在水平臺面上,揭開上面的透明薄膜,用滅菌吸管吸取樣品原液或稀釋液1mL,均勻加到中央的紙片上,輕輕將上蓋膜放下,靜置5 min使培養基凝固,最后用手輕輕地壓一下。每個稀釋度接種兩片。
3.3培養: 將測試片疊在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒溫培養箱內,堆疊片數不超過12片。培養溫度為36℃±1℃,培養15~24h。

4 結果判斷與計數:
4.1細菌在紙片上生長后會顯示紅色斑點,選擇菌落數適中 (10個~100個)的紙片進行計數,乘以稀釋倍數后即為每克 (或毫升)樣品中所含的細菌菌落總數。菌落數在100以內時, 按實有數報告。大于100時,用二位有效數字, 二位有效數字后面的數字,以四舍五入方法計算, 并以10的指數來表示。
4.2計數原則與報告方式
4.2.1 通常選擇菌落在10個~100個之間的紙片進行計數, 乘以稀釋倍數報告之(見下表中例次1)。
國家標準菌落總數報告方式術語為cfu/g或mL, cfu的含義為菌落形成單位。
4.2.2 若有兩個稀釋度的菌落數在10個~100個之內, 兩者的比值小于2,則取其平均數,若大于2,則采用稀釋度小者報告 (見下表中例次2和例次3)。
4.2.3 若三個稀釋度的菌落數都有在10個~100個之內時, 應選擇二個低數值的平均數(見下表中例次4)。
4.2.4 若三個稀釋度的菌落數均小于10個或大于100個時, 應重新試用更低或更高的稀釋度進行菌落計數; 或采用均小于數量標準的最小值,或采用均大于數量標準的最大值 (見下表中例次5和例次6)。

實例 稀釋度 兩稀釋度之比 選定計數稀釋度 報告方式(個/g或個/mL)
10-1 10-2 10-3
1 158 76 5 10-2 7.6×103
2 208 68 12 1.8 10-2、10-3 9.4×103
3 265 82 50 6.1 10-2 8.2×103
4 98 50 15 10-1、10-2 3.0×103
5 8 5 1 10-1 8.0×10
6 295 174 106 10-3 1.1×105

5 表面取樣方法: 加1mL滅菌生理鹽水在測試片上,靜置至少1h使培養基凝固;提起上層膜,使中央濾紙部分貼到待測物表面,用手在外側輕壓;然后將上蓋膜合上,置培養箱內培養。

6 注意事項: 使用過的紙片上帶有活菌,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。

菌落數少時的情況 菌落數多時的情況
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